Projeto de pesquisa

Dez espécies de corais escleractínios serão coligidas de três ambientes recifais brasileiros com diferentes níveis, a priori, de turbidez e sedimentação: Fernando de Noronha, Maragogi/AL e Porto Seguro/BA. Para cada uma das três regiões, os recifes de coral serão amostrados em triplicata, com uma distância superior a 0,5 km entre eles. As espécies de coral serão, a saber: Agaricia fragilis, Favia gravida, Madracis decactis, Montastraea cavernosa, Mussismilia harttii e M. hispida, Porites astreoides e P. branneri, Scolymia wellsi e Siderastrea stellata.

Para cada sítio de coleta, diferentes parâmetros físico-químicos serão auferidos: temperatura, oxigênio dissolvido, salinidade, pH, luminosidade e turbidez. A água do mar local será filtrada para análise da matéria orgânica em suspensão, a qual será expressa como massa percentual de C, H, N e S.

Para cada população de coral amostrada, indivíduos/fragmentos (N=10) serão coletados e imediatamente armazenados em nitrogênio líquido para posterior análise, as quais envolverão: (i) isótopos estáveis de C e N [coral, simbiontes, zooplâncton e matéria orgânica particulada], (ii) capacidade antioxidante total, (iii) danos em biomoléculas (lipoperoxidação), e (iv) concentração de clorofila a e densidade de endossimbiontes. Serão também conduzidas a (v) identificação molecular dos simbiontes via ITS e (vi) uma análise filogenética dos corais via CO1. Tais analises serão realizadas no CEBIMar-USP, IB-USP, UFRJ ou FURG.
Especificamente:

(i) O material biológico para analise isotópica será enviado ao Centro de Energia Nuclear na Agricultura, e será empregado um analisador elementar acoplado a um espectrômetro de massas de razão isotópica de fluxo contínuo.
(ii) A capacidade antioxidante total dos organismos será medida utilizando-se o kit comercial colorimétrico “OxiSelect™ Total Antioxidant Capacity (TAC) Assay Kit”, o qual é baseado no método de redução do cobre (II) em cobre (I) por antioxidantes.
(iii) A peroxidação lipídica será determinada utilizando-se o método fluorimétrico, o qual baseia-se na medida das substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico. Esta metodologia quantifica os danos peroxidativos em lipídios por meio da reação do malondialdeído, um dos produtos da peroxidação lipídica, com o ácido tiobarbitúrico.
(iv) A densidade de endossimbiontes e a quantificação de clorofila a são utilizados como indicadores de branqueamento em corais. A densidade de endossimbiontes será determinada por meio de um hemocitômetro. A clorofila a será extraída no escuro em N, N-dimetilformamida, a 4°C por 48h que, após centrifugação em 3900 g a 4 °C por 5 min, e terá o sobrenadante lido em 646 nm, 663 nm e 750 nm.
(v) O DNA genômico total dos simbiontes e dos hospedeiros será extraído por meio de um kit de extração seguindo as orientações dos fabricantes. Para a identificação dos tipos de ITS2, a região do espaçador interno transcrito 2 do rDNA (ITS2) será amplificada via PCR, utilizando-se iniciadores específicos para Symbiodiniaceae. O mesmo será conduzido para o CO1 dos corais, sendo as sequencias alinhadas e as reconstruções filogenéticas conduzidas por verossimilhança.

As análises estatísticas serão conduzidas via diferentes métodos filogenéticos assumindo-se a filogenia a ser gerada com os respectivos comprimentos de ramo (distância genética). Diferentes modelos evolutivos serão empregados a fim de se conferir poder estatístico equivalente às análises estatísticas tradicionais.