Projeto de pesquisa

Em organismos bioluminescentes, para que se possa estudar o mecanismo químico de luminescência é crucial que se utilize os componentes purificados, uma vez que os resultados obtidos com extratos brutos ou impuros são difíceis de interpretar e frequentemente levam a interpretações errôneas. Portanto, o isolamento e purificação das substâncias essenciais para a emissão de luz, como a luciferina, luciferase e fotoproteína é extremamente importante. Como sistemas bioluminescentes são bastante variados em seus mecanismos e natureza química de seus constituintes, métodos individuais para isolar e purificar as substâncias de interesse precisam ser projetados especificamente para cada tipo de organismo. Todas as formas de fotoproteínas já estudadas emitem luz espontaneamente e continuamente, mesmo na presença de inibidores ou agentes quelantes. Essa emissão de luz de baixa intensidade, porém permanente, resulta em uma deterioração gradual da capacidade de luminescência dessas proteínas o que torna sua purificação bastante complexa. Em vista das constantes perdas de atividade verificadas durante as tentativas de extração e purificação da fotoproteína no projeto passado, serão investigadas novas maneiras de se isolar luciferina e fotoproteína, cada uma delas separadamente, baseando-se na capacidade de regeneração dessa classe de enzimas. Para o isolamento da fotoproteína, a estratégia consistirá em purificar essa proteína em sua forma apo e depois, na presença de luciferina, regenerá- la novamente para testar sua atividade enzimática. Para tanto, serão feitas adaptações na metodologia de regeneração das fotoproteínas aequor