Projeto de pesquisa

Considerando sua associação com esponjas e as características fisiológicas dos traustoquitrídeos, será feito inicialmente culturas de células primárias a partir dos tecidos de esponjas coletadas no Canal de São Sebastião (licença para as coletas 28917-1), visando o a formação de agregados celulares denominados primorfos. Inicialmente, serão utilizadas as esponjas marinhas Hymeniacidon heliophila, Haliclona melana e Polymastia janeirensis, nas quais os traustoquitrídeos já foram observados. Utilizando métodos de cultura já descritos na literatura, será feito o isolamento e cultivo dos microrganismos de interesse utilizando meios modificados. Após essa etapa será feita a identificação taxonômica dos microorganismos através do sequenciamento do 18S rDNA. A partir das características das cepas isoladas, será investigada a sua localização nas esponjas íntegras e nas células em cultura in vitro. Para esse fim as amostras de tecidos de esponjas e primorfos serão corados com compostos (Acriflavina e Calcofluor-White) que interagem com a parede celular do protista e então submetidos à microscopia de fluorescência. Será verificado se os microorganismos estão colocados externamente ou internamente à membrana celular ou se há algum tipo celular específico, como é o caso de algumas cepas bacterianas (bacteriócitos). Também será determinada uma eventual localização específica nos tecidos das esponjas (i.e. base, mesohilo, superfície ou sistema aquífero). A partir da identificação, caracterização metabólica e localização, serão avaliadas as possíveis interações fisiológicas entre o protista e a esponja. Como investigação inicial da translocação de ácidos graxos entre o traustoquitrídeo e seu hospedeiro será utilizada cromatografia gasosa acoplada a um espectrômetro de massas para determinar os perfis de ácidos graxos de culturas axênicas de traustoquitrídeos assim como nos tecidos e culturas primárias das esponjas. Feito esse procedimento, os dados serão comparados, buscando moléculas específicas de protistas compartilhadas com o hospedeiro, indicando a translocação.