Projeto de pesquisa

Serão utilizados adultos de E. marginatus coletados em ambiente natural (G1) por pescadores artesanais no município de São Sebastião-SP. Para o grupo de cativeiro (G2), os animais adultos nascidos e criados em cativerio serão adquiridos da piscicultura comercial Redemar alevinos (Ilhabela/ SP). Considerando o status de ameaça da espécie, serão utilizados o mínimo possível de animais (cerca de 10 indivíduos por grupo experimental). Para o G1, os animais coletados em ambiente natural serão transferidos ao CEBIMar, anestesiados e eutanasiados (de acordo com as normas do Comitê de Ética do IB/USP) e serão coletados amostras de encéfalos, hipófises e gônadas e logo em seguida, congelados em nitrogênio líquido para posterior análises moleculares. Para o G2, os animais adquiridos na empresa Redemar, também serão transferidos ao CEBIMar e os mesmos tecidos serão coletados e congelados. Para a confirmação do estágio reprodutivo, amostras das gônadas serão avaliadas por técnicas rotineiras de histologia. Essas amostras serão usadas para análise molecular da expressão dos genes associados ao eixo H-H-G, através da técnica RT-PCR. Para o hipotálamo serão analisadas as expressões gênicas de gnrh e aromatase cerebral e, assim como para as gônadas, os marcadores moleculares dos genes alvo da via esteroidogênica e da diferenciação sexual (sox9, dmrt1, amh, foxl2 ,20-hsd e aromatase gonadal) serão analisadas de acordo com os primers já descritos para o gênero Epinephelus (Chai et al. 2013; Sun et al. 2016; Palma et al. 2018). Para a hipófise, a expressão gênica das gonadotropinas (FSH e LH) serão utilizadas primers já descritas pelo nosso grupo de pesquisa para E. marginatus (Garcia et al. 2013). É importânte salientar que todos estes primers já foram testados e padronizados para E. marginatus. Serão obtidos também dados do perfil plasmático dos esteroides sexuais (T, E2 e 11-KT) pelo método de ELISA (Elisaimunoensaio) com uso de kits comerciais.