Projeto de pesquisa

Este projeta visa, de forma inédita, identificar a diversidade microbiana associada ao coral azooxantelado Tubastraea tagusensis (saudável e apresentando diferentes estágios de necrose) que serão coletadas ao largo da Ilha dos Búzios, litoral norte do Estado de São Paulo, utilizando a embarcação em colaboração com a doutoranda Andréia. Uma vez coletadas, as amostras terão seus respectivos DNAs extraídos através de kits comerciais de extração por coluna. Nesta etapa, utilizando marcadores bacterianos universais desenvolvidos por Watanabe e colaboradores (2001), será amplificada uma fração (~400pb) da subunidade menor da molécula de ácido nucléico ribossomal (16S rDNA). Para cada amplificação a ser realizada, ambos os primers utilizados possuirão identificação única (tag), permitindo desta forma o sequenciamento simultâneo de inúmeras amostras com a utilização de técnicas de sequenciamento de nova geração (neste caso possivelmente o multiplex - plataforma 454). Nesta etapa espera-se ter a cobertura/sequenciamento de aproximadamente 90% da diversidade bacteriana presente em cada espécime de coral analisada. Paralelamente, visando à obtenção de mais dados quantitativos, parte dos amplicons bacterianos obtidos a partir de cada espécime de coral será analisado utilizando-se da técnica de eletroforese em gel de gradiente de desnaturação (DGGE) desenvolvida por Muyzer e Smalla (1998). Destaca-se ainda que a identificação de cada grupo de sequências bacterianas será obtida através de análises filogenéticas onde serão utilizados programas como ARB, PHYML e MrBayes.