Projeto de pesquisa

As coletas dos animais ocorrem, preferencialmente, nos períodos da manhã e no crepúsculo, depois do horário de baixa da maré, realizando arrastos de cerca de 10 metros na zona de arrebentação do mar. Os arrastos são repetidos de 3 a 6 vezes na mesma praia, de forma a conseguir uma quantidade expressiva de indivíduos. Após a realização dos arrastos, o
material é fixado em álcool 100% e separado dos demais organismos. A fim de utilizar apenas os organismos alvos do projeto de iniciação científica, a triagem morfológica do material coletado nas praias será realizada nos pontos de
coleta a partir da observação de alguns dos caracteres morfológicos determinantes das espécies de Mysida – formato do telson, formato e tamanho das pleópodes e formato e tamanho do urópode (Boltovskoy, 1999).
A junção da identificação morfológica com os resultados moleculares obtidos permitirão, então, averiguar se essas espécies se tratam de apenas uma espécie ou um complexo de espécies crípticas. As demais espécies serão registradas para atualização dos sítios de distribuição geográfica, se necessário.
Os espécimes de misidáceos coletados terão seu DNA extraído a partir do protocolo CTAB proposto por Doyle & Doyle (1987). A qualidade do material genômico extraído será aferida através de eletroforese de gel de agarose com marcador gel RED 3% e a quantificação das amostras será realizada no espectrofotômetro Nanodrop. A amplificação de fragmentos dos genes mitocondrial COI e nuclear 18SrRNA será feita com os primers LCO 1490 e HCO2198 (Flomer, 1994) e 1F⁄5R, 3F⁄18Sbi e 18Sa2.0⁄9R (Giribet et al., 1996; Whiting et al., 1997), respectivamente, utilizando o kit Taq PCR Master Mix (Qiagen®), contendo 2,5 unidades de DNA Polimerase TAQ, 1 unidade de Buffer para PCR QIAGEN, 1,5mM de MgCL2, 200 μM de cada DNTP e 0,35 μM de cada oligonucleotídeo Qiagen. A reação de amplificação seguirá as seguintes etapas: desnaturação inicial a 94°C por 1 minuto; 35 ciclos de desnaturação a 94°C por 1 minuto; anelamento numa faixa de 50.