Projeto de pesquisa

Os indivíduos de Emerita analoga serão coletados na costa de Las Cruces (latitude 33,498438°S ; longitude 71,635025°W) e de Emerita brasiliensis na costa do Brasil, especificamente em São Sebastião (latitude 23,828325°S ; 45,423048°W). Selecionaremos 3 transectos horizontais de 50 metros cada, em 3 praias diferentes em cada localidade. Coletaremos aleatoriamente nos 3 transectos entre 200 e 250 indivíduos no total, mantendo-os em contêineres com água do mar, areia e borbulhamento de ar. Depois que todos os espécimes forem coletados, eles serão imediatamente levados para as instalações dos respectivos centros de pesquisa (ECIM e CEBIMar). Ao mesmo tempo, usando um termômetro e um multiparâmetro, faremos medições aleatórias de temperatura (°C) e oxigênio (mg O2/L) nos locais de amostragem.

No laboratório, registraremos a massa corporal (g) de todos os indivíduos amostrados e, em seguida, os separaremos em três grupos de aproximadamente 80 indivíduos cada, correspondentes aos tratamentos de hipóxia, normóxia e hiperóxia. Definimos cinco temperaturas que consideramos estressantes no "curto" prazo (ou seja, horas) para ambas as espécies, a saber, 33, 34, 35, 36 e 37 °C. Em seguida, realizamos medições de tempo de morte térmica ou TDT (Rezende et al., 2014) em cada uma dessas temperaturas e condições de oxigênio, designando, por tratamento, aproximadamente 15 indivíduos em cada temperatura de medição.

Usaremos nitrogênio ultrapuro e uma mangueira conectada a uma pedra de difusão para borbulhar esse gás no aquário e diminuir a concentração de oxigênio (Verberk et al., 2023) até atingirmos e mantermos a água em condições de hipóxia (~ 4 mg O2/L). Para água normóxica, borbulharemos ar com uma bomba de ar em intensidade média, até atingir uma concentração entre 8 e 9 mg O2/L. Por fim, para tornar a concentração de oxigênio na água hiperóxica, borbulharemos ar com 3 bombas difusoras na intensidade máxima dentro do aquário, até atingir níveis > 12 mg O2/L. A concentração de oxigênio durante esse procedimento e todas as medições serão monitoradas por um multiparâmetro. Finalmente, posicionaremos cada indivíduo dentro de garrafas de urina de 125 mL semiabertas (Fig. 3B) e as colocaremos dentro do aquário sob cada tratamento. Registramos com um cronômetro o início de cada medição, que começa imediatamente quando o indivíduo está completamente submerso na água. O critério de colapso para cada condição (ou seja, hipóxia, normóxia, hiperóxia) é determinado usando uma haste de metal de 20 cm com a qual estimulamos o espécime quando ele para de se mover. A estimulação será realizada em uma frequência de 5 minutos na temperatura mais baixa (especificamente a 33 °C) e a cada 10 segundos em todas as outras temperaturas. Estabelecemos o critério de colapso para todos os indivíduos de cada espécie como o momento em que, ao ser virado com a haste metálica, ele não foi capaz de retornar à sua posição natural (Vinagre et al., 2015).