Parecer da Comissão Científica

Aprovado
Projeto Externo - de Outra Unidade da USP

Dados do solicitante

Andrews Krupinski Emerenciano

Natureza do projeto

Projeto de formação discente
Mestrado
José Roberto Machado Cunha da Silva
Por favor, selecione

Pesquisadores ou docentes associados

João Carlos Shimada Borges
Paola Cristina Branco
Débora Alvares Leite Figueiredo
Douglas Amaral dos Santos

Recursos

A bolsa auxilia no custeio da estadia para o desenvolvimento do projeto.
Fapesp

Descrição do projeto

Ação do equinocromo na resposta imune inata do ouriço-do-mar Lytechinus variegatus (Lamarck, 1816)
01-06-2012
28-03-2014

O equinocromo é um pigmento naftaquinônico encontrado no interior dos grânulos de esferulócitos vermelhos, células do celoma perivisceral (celomócitos) do ouriço-do-mar Lytechinus variegatus. Esta célula tem sido considerada um biomarcador, devido ao seu aumento em número em diferentes condições de estresse. O equinocromo, que é considerado um transportador de oxigênio, age tanto na oxidação quanto na anti-oxidação de estruturas, sendo o oxidante de um sistema de oxidação-redução reversível, e é ativo contra uma série de bactérias gram-positivas e gram-negativas na concentração de 50 microg/ml. Desse modo, ele está presente nas infecções como agente bactericida e como coagulador, participando na formação de complexos que atuam em diferentes momentos fisiológicos do animal. O presente projeto pretende correlacionar o equinocromo e os processos do sistema imunológico inato, por meio da ação de diferentes concentrações de equinocromo (50 e 100 microg/ml) na atividade quimiotática e na atividade fagocítica de amebócitos fagocíticos do ouriço-do-mar. Para isso, será utilizado o Transwell para os ensaios quimiotáticos e, para os ensaios de fagocitose, os índices fagocíticos, capacidade fagocítica e a capacidade germicida dessas células frente ao LPS e leveduras. Os resultados obtidos poderão contribuir para elucidar funções ainda desconhecidas desta naftoquinona, e assim ajudar a esclarecer os mecanismos de resposta imune inata em equinodermos além da melhor avaliação destes animais.

equinocromo, equinóides, imunidade inata, fagocitose, ouriço-do-mar.
Os ouriços serão mantidos em caixas d água no biotério do Centro de Biologia Marinha-USP, e aclimatados por 1 semana com fotoperíodo natural e alimentados semanalmente com algas marinhas. Contagem de celomócitos e leveduras: Uma alíquota de 150microL do líquido celomático será retirada e colocada em câmara de Neubauer para contagem diferencial dos celomócitos, com microscopia de contraste de fase. A contagem total de leveduras será realizada sob microscopia de fase em câmara de Neubauer com 1mg de leveduras comerciais em 15 ml de água do mar. Teste de viabilidade fúngica: Utilizamos leveduras Saccharomyces cerevisae com viabilidade maior que 90%. Uma solução de diacetato de fluoresceína em acetona e brometo de etídeo em água do mar será utilizada para identificar as leveduras fagocitadas, vivas e mortas. Foram utilizados leveduras por serem microorganismos não patogênicos eficientes na indução de respostas inespecíficas de invertebrados. Teste de migração celular: Serão utilizados transwells para os ensaios de migração celular, onde o controle negativo (água do mar), controle positivo (Levedura, LPS e Soro fetal) e o tratado (Equinocromo), serão utilizados para estimular as células (106 cel/ml) a quimiotaxia.

Todas as etapas descritas abaixo serão realizadas no CEBIMar. As atividades serão realizadas aproximadamente 3 a 4 vezes por ano

Coleta dos animais: Exemplares dos ouriços-do mar Lytechinus variegatus (n=30), machos e fêmeas , serão colhidos manualmente por mergulho livre . Não será necessário sacrificar os animais; após o periodo de experimento os animais serão reaclimatados e devolvidos ao mar



Contagem dos celomócitos

Teste de viabilidade fúngica

Teste de migração celular

Ensaios de fagocitose in vitro

Índices de fagocitose

Solicitações

Um laboratório e o biotério marinho
pHmetro, centrífuga e microscópio de fase.
Ouriços-do-mar Lytechinus variegatus
Ao redor da Ilha Tiasussê na praia de Barequeçaba
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