Parecer da Comissão Científica

Aprovado
Projeto Externo - de Outra Unidade da USP

Dados do solicitante

Rogério Oliveira Faleiros

Natureza do projeto

Projeto de docente ou pesquisador
Selecione ou escolha outra natureza do projeto
Projeto de Pós-Doutorado

Pesquisadores ou docentes associados

Samuel Coelho de Faria
Mariana Vellosa Capparelli

Recursos

Bolsa de Pós-Doutorado
Fapesp
auxílio (regular)individual à pesquisa
Fapesp

Descrição do projeto

Expressão de RNAm e atividade enzimática de transportadores iônicos nas brânquias de caranguejos do gênero Uca, os chama-marés
01-06-2012
30-11-2015
Os crustáceos constituem um táxon extremamente diverso e amplamente distribuído. A sobrevivência e o sucesso desse grupo resulta em parte da seleção diferencial de mecanismos fisiológicos que proporcionam a manutenção de um meio interno osmotica- e iônicamente estável, meio este que protege as células e tecidos contra as oscilações do meio externo, e que aparentemente permitiu a conquista de ambientes dos mais variados, desde os aquáticos de águas doce e salgada até o terrestre, passando por águas costeiras e estuários, ambientes de salinidade variável. Dentre as adaptações fisiológicas que permitiram a conquista desses ambientes osmoticamente hostis, incluem-se a redução da permeabilidade corporal, e a absorção e secreção eficiente de sal pelo epitélio branquial onde atuam transportadores iônicos como a Na+/K+- e V-ATPase e o simportador Na+/K+/2Cl-. Avaliar-se-á aqui processos bioquímicos e moleculares relacionados à fisiologia osmorregulatória em caranguejos chama-maré do gênero Uca, amplamente distribuídos em habitats osmoticamente diversos na costa brasileira (Baía de Guaratuba, litoral do Paraná; Praia de Itamambuca, litoral de São Paulo). Comparar-se-á tanto a expressão das subunidades alpha e B da Na+/K+- e V-ATPase branquial, respectivamente, quantificando o RNAm por RT-PCR em tempo real quanto suas correspondentes atividades enzimáticas específicas. Além disso, será investigada também por análise de expressão de RNAm por RT-PCR em tempo real, a participação do simportador Na+/K+/2Cl- nesses processos. Os achados contribuir
Osmorregulação, V-ATPase, Na+/K+-ATPase, expressão de RNAm, caranguejo chama-mares (Uca), simportador Na+/K+/2Cl-
4.1 - Coleta e manutenção dos caranguejos em laboratório
Com autorização prévia do IBAMA (licença 29594-1), aproximadamente 50 espécimes de cada espécie de caranguejo chama-maré do gênero Uca serão coletados na Baía de Guaratuba/PR (área de aproximadamente 40 km2, entre as coordenadas 48˚30 W, 25˚50 S e 48˚45 W, 25˚54 S), de acordo com Masunari (2006). Uca vitoriana será coletada em Itamambuca/ Ubatuba/SP (45.00'43.76"W, 23.24'27.30"S). Os espécimes serão coligidos manualmente das galerias ou diretamente da superfície do substrato. Os caranguejos serão transportados em pequenas caixas com esponjas umedecidas com água do local de coleta ao Centro de Biologia Marinha da Universidade de São Paulo (CEBIMar/USP) em São Sebastião/SP ou ao Laboratório de Fisiologia de Crustáceos (LFC) do Depto de Biologia da Faculdade de Filosofia, Ciências e Letras de Ribeirão Preto, onde permanecerão por três dias a 25 .C para o início dos experimentos de aclimatação.
4.2. - Aclimatação dos caranguejos e medidas da osmolalidade e de concentração de Cl- da hemolinfa
Grupos experimentais de 5-10 animais serão aclimatados em pequenas caixa

Janeiro - Junho/2012
Atualização bibliografia;
Visita ao museu de Zoologia da USP (MZUSP) - reconhecimento das espécies do gênero Uca que serão estudadas;
Coleta de espécies de Uca na Baía de Guaratuba/PR (exceto U. vitoriana);
Coleta de U. vitoriana, Itamambuca/ Ubatuba/SP;
Dissecção das brânquias das espécies de Uca para extração de RNA total e padronização dos ensaios bioquímicos.
Julho - Dezembro/2012
Atualização bibliografia;

Clonagem, sequenciamento e análise junto ao banco de dados;
Confecção dos primers específicos para os transportadores Na+/K+-, VATPase, Na+/K+/2Cl- e controle endôgeno PRL10 para as dez espécies de Uca;
Padronização condições reacional para análise de atividade enzimática;
Organização dos resultados;
Entrega do relatório científico #1.
Janeiro - Junho/2013
Atualização bibliografia;
Coleta de espéc

Solicitações

sala de tanques para manutenção e exposição dos caranguejos, um espaço para dissecção dos mesmos.
Lupa, Freezer -20 graus célsius e centrifuga refrigerada
Coleta de Uca vitoriana e possivelmente de outras 9 espécies de caranguejo chama-maré (U. burgersi, U. cumulanta, U. leptodactyla, U. maracoani, U. mordax, U. rapax, U. thayeri, U. uruguayensis e U. v
Uca vitoriana - Itamabuca/Ubatuba/SP;
As outras espécies serão coletadas, se necessário, na região de Bertioga/SP
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Eventual utilização, se possível, do laboratório de biologia molecular (especificamente uso de um termociclador)
  • NEC_STRUCT
  • NEC_TECH_SUPP
  • NEC_TECH_SUPP_COLLEC
  • NEC_COLLEC
  • NEC_VESSEL
Por favor, selecione
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