Projeto de pesquisa

Este projeto faz parte de uma proposta (projeto regular de Pós-Doutorado) aprovada pela FAPESP/Processo 2011/13635-9. Identificamos e parcialmente caracterizamos uma proteína RNA-ligante de 65 kDa (p65) como um novo membro da família de proteínas RNA-ligante pertencente ao grupo hnRNPA nos terminais pré-sinápticos dos neurônios fotorreceptores de lulas (Loligo plei, espécie do Atlântico Sul e Loligo pealei, espécie do Atlântico Norte). A p65 foi inicialmente identificada com base na sua imunorreatividade a um anticorpo policlonal, C4, Lico D.T.P et al., 2010. A fim de determinar se a p65 tem uma função sináptica, microinjectado o anticorpo C4 no terminal pré-sináptico da sinapse gigante de lulas e o resultado foi que este anticorpo (C4) bloqueou a neurotransmissão sináptica Roy E. Larson et al., manuscrito submetido. Análises in silico partindo das sequências de aminoácidos da p65 purificada obtidas por espectrometria de massas, onde que sua identidade foi buscada em um banco de expressed sequence tag (ESTs) de L. pealei, localizamos com uma cobertura de 94% de identidade (46 de 49 aminoácidos) um contig (contig 976) de L.pealei. Este contig apresentou uma fase aberta de leitura (ORF) capaz de codificar uma proteína de 37 kDa, que possui os domínios estruturais RNA recognition motifs (RRMs), também referido aqui como RNA binding protein domains (RBP1 e RBP2) conservados. Os motifs RNPs estão dispostos de forma duplicada e ordenada no sentido N-terminal para C-terminal como 2xRBP2/RBP1, juntamente com RGG box e poli-G. Para comprovarmos uma correlação estrutural entre o contig 976 e a p65, produzimos anticorpos específicos policlonais imunorreativos a um peptídeo sintético d