Projeto de pesquisa
Parecer da Comissão Científica
Projeto do CEBIMar
Dados do solicitante
André Gustavo Tempone Cardoso
Natureza do projeto
Projeto de docente ou pesquisador
Projeto autônomo
Pesquisadores ou docentes associados
Alvaro Esteves Migotto
Maiara Maria Romanelli Silva
Recursos
Projeto Regular
Fapesp
Descrição do projeto
Investigação in vitro do Potencial Anti-Leishmania de Metabólitos Marinhos
28-02-2019
28-08-2024
Doenças parasitárias causadas por protozoários afetam grandes populações marginais ao processo econômico globalizado, e desta forma, não são vistas como mercados potenciais. A leishmaniose visceral (LV) é uma protozoose negligenciada fatal que afeta mais de 10 milhões de pessoas em todo o mundo. Contando com uma terapia altamente tóxica e bastante limitada, a busca por alternativas terapêuticas é uma necessidade iminente. O presente projeto visa isolar e identificar metabólitos (peptídeos e metabólitos secundários) provenientes de diferentes fontes como invertebrados marinhos, sedimentos de águas rasas, assim como da microbiota associada aos mesmos. Utilizando diferentes técnicas de separação e cromatográficas, aliados aos ensaios biomonitorados, o presente estudo visa isolar e caracterizar novos compostos com atividade anti-Leishmania (L.) infantum. Os compostos mais ativos serão avaliados contra formas extracelulares e amastigotas intracelulares dos parasitas, assim como em células de mamíferos para citotoxicidade. A elucidação estrutural dos compostos isolados será realizada por técnicas espectrométricas (LC/MS-MS) e espectroscópicas (RMN 1H e 13C). O estudo do mecanismo de ação dos compostos mais ativos nos parasitas estudados, será realizado por meio de diferentes técnicas como citometria de fluxo e espectrofluorimetria. Desta forma, o presente estudo visa contribuir com novos compostos naturais da biodiversidade marinha para que possam servir de protótipos farmacêuticos para doenças parasitárias negligenciadas.
leishmania, terapia, metabólitos, organismos marinhos, microorganismos
Coleta e extração de materiais: Exemplares dos invertebrados marinhos, com ênfase em Tubastrea spp., Aiptasia pallida, Leptogorgia punicea, Carijoa riisei, Macrorhynchia phillipina, Zoanthus sociatus e Palythoa caribaeorum, serão coletados preferencialmente nas proximidades do CEBIMar em São Sebastião por meio de mergulho livre ou autônomo e preservados em metanol, a -20.C, até o início dos procedimentos de extração. Os invertebrados serão triturados em metanol e em seguida será feita a filtração do material e evaporação do filtrado em evaporador rotativo.
Isolamentos e Caracterizações: Compostos ativos serão isolados através de diferentes técnicas cromatográficas como CCD ou CLAE - Cromatografia Líquida de Alta Eficiência.CLAE (Cromatografia Líquida de Alta Eficiência).
Análise da Microbiota de Invertebrados Marinhos e Sedimentos Marinhos: Os microorganismos serão coletados dos invertebrados marinhos e sedimentos marinhos, cultivados utilizando diferentes meios de cultura e identificados inicialmente no Instituto Adolfo Lutz.
Parasitas e Células: Promastigotas de Leishmania (L.) infantum serão cultivados em meio M-199 suplementado com 10% de soro fetal bovino, à 24.C. Tripomastigotas de Trypanosoma cruzi serão cultivados em células LLC-MK2 com meio RPMI-1640, suplementado com 2% de SFB a temperatura de 37.C em estufa com 5% CO2.
Estudos de Eficácia in vitro - Amastigotas Intracelulares: Os compostos serão incubados com os parasitas por 48 hs e corados com Giemsa. A CE50 será determinada por microscópio óptico.
Citotoxicidade: Os compostos serão incubados com células NCTC clone 929 em placas de 96 poços por 48-96 horas. A viabilidade será determinada com MTT.
Isolamentos e Caracterizações: Compostos ativos serão isolados através de diferentes técnicas cromatográficas como CCD ou CLAE - Cromatografia Líquida de Alta Eficiência.CLAE (Cromatografia Líquida de Alta Eficiência).
Análise da Microbiota de Invertebrados Marinhos e Sedimentos Marinhos: Os microorganismos serão coletados dos invertebrados marinhos e sedimentos marinhos, cultivados utilizando diferentes meios de cultura e identificados inicialmente no Instituto Adolfo Lutz.
Parasitas e Células: Promastigotas de Leishmania (L.) infantum serão cultivados em meio M-199 suplementado com 10% de soro fetal bovino, à 24.C. Tripomastigotas de Trypanosoma cruzi serão cultivados em células LLC-MK2 com meio RPMI-1640, suplementado com 2% de SFB a temperatura de 37.C em estufa com 5% CO2.
Estudos de Eficácia in vitro - Amastigotas Intracelulares: Os compostos serão incubados com os parasitas por 48 hs e corados com Giemsa. A CE50 será determinada por microscópio óptico.
Citotoxicidade: Os compostos serão incubados com células NCTC clone 929 em placas de 96 poços por 48-96 horas. A viabilidade será determinada com MTT.
2019
1. Semestre: Coletar e identificar invertebrados marinhos e sedimentos marinhos. Cultivo e identificação da microbiota.
2. Semestre: Coletar e identificar invertebrados marinhos. Cultivo e identificação da microbiota. Isolamento de metabólitos secundários. Avaliar a potência e seletividade in vitro dos compostos nos parasitas.
2020
1. Semestre: Coletar e identificar invertebrados marinhos e sedimentos marinhos. Cultivo e identificação da microbiota. Isolamento de metabólitos secundários e peptídeos. Avaliar a potência e seletividade in vitro dos compostos nos parasitas.
2. Semestre: Coletar e identificar invertebrados marinhos e sedimentos marinhos. Cultivo e identificação da microbiota. Isolamento de metabólitos secundários e peptídeos. Avaliar a potência e seletividade in vitro dos compostos nos parasitas. Avaliar os possíveis mecanismos de ação de compostos puros.
2021
1. Semestre: Coletar e identificar invertebrados marinhos e sedimentos marinhos. Cultivo e identificação da microbiota. Isolamento de metabólitos secundários e peptídeos. Avaliar a potência e seletividade in vitro dos compostos nos parasitas. Avaliar os possíveis mecanismos de ação de compostos puros.
1. Semestre: Coletar e identificar invertebrados marinhos e sedimentos marinhos. Cultivo e identificação da microbiota.
2. Semestre: Coletar e identificar invertebrados marinhos. Cultivo e identificação da microbiota. Isolamento de metabólitos secundários. Avaliar a potência e seletividade in vitro dos compostos nos parasitas.
2020
1. Semestre: Coletar e identificar invertebrados marinhos e sedimentos marinhos. Cultivo e identificação da microbiota. Isolamento de metabólitos secundários e peptídeos. Avaliar a potência e seletividade in vitro dos compostos nos parasitas.
2. Semestre: Coletar e identificar invertebrados marinhos e sedimentos marinhos. Cultivo e identificação da microbiota. Isolamento de metabólitos secundários e peptídeos. Avaliar a potência e seletividade in vitro dos compostos nos parasitas. Avaliar os possíveis mecanismos de ação de compostos puros.
2021
1. Semestre: Coletar e identificar invertebrados marinhos e sedimentos marinhos. Cultivo e identificação da microbiota. Isolamento de metabólitos secundários e peptídeos. Avaliar a potência e seletividade in vitro dos compostos nos parasitas. Avaliar os possíveis mecanismos de ação de compostos puros.
Solicitações
Bancada para separação de material e preparo de extratos.
Não serão necessários a utilização de equipamentos.
Aiptasia pallida, Carijoa riisei, Macrorhynchia phillipina, Zoanthus sociatus e Palythoa caribaeorum, Tubastraea spp.
A coleta será realizada nas proximidades do CEBIMar, São Sebastião.
não
- NEC_TECH_SUPP_COLLEC
- NEC_VESSEL
- Fevereiro
- Março
- Outubro
2
2