Parecer da Comissão Científica

Projeto do NP-BioMar

Dados do solicitante

Diogo Destro Barcellos

Natureza do projeto

Projeto de formação discente
Mestrado
Márcio Reis Custódio
Por favor, selecione

Pesquisadores ou docentes associados

Recursos

130865/2021-4
CNPq

Descrição do projeto

Avaliação da capacidade de osmoconformação em esponjas marinhas.
05-07-2021
31-12-2024
Alterações importantes e não controladas de volume e concentrações de solutos podem comprometer uma grande variedade de funções celulares e resultar na morte do organismo. Desta forma, mecanismos de controle e manutenção do volume celular são essenciais, particularmente em organismos sujeitos a desafios osmóticos extremos. Este é o caso de animais de ambientes intertidais (entremarés), onde estão expostos a períodos de altas salinidades, pela dessecação, ou mesmo a exposição à água doce durante chuvas. No entanto, diversos grupos ocupam estes locais, em particular alguns metazoários basais onde sistemas teciduais específicos de osmorregulação não estão presentes. Este é o caso de algumas espécies de esponjas (filo Porifera), cujos mecanismos utilizados e limites de tolerância ainda são pouco conhecidos. Sendo assim, o objetivo geral deste projeto é investigar estes mecanismos, visando: 1) Avaliar a capacidade de regulação do volume celular de esponjas quando submetidas a choques osmóticos; 2) Comparar a capacidade de regulação do volume, tempo de resposta e variação no volume celular em espécies cujos habitats normais são ambientes distintos: intertidal e fundo; 3) Avaliar o envolvimento de aquaporinas (AQPs) na regulação do volume celular nas espécies nestes dois ambientes; 4) Verificar o perfil de flutuação na presença de AQPs na espécie intertidal durante o ciclo de maré. Esperamos que esponjas intertidais apresentem mecanismos osmorregulatórios mais flexíveis e robustos quando comparadas com espécies de fundo, e que sejam capazes de ajustar estes mecanismos de forma antecipada aos períodos de maré baixa.
Porifera, Marés, Osmoconformação, Aquaporina.
Serão usadas as espécies Hymeniacidon heliophila (intertidal) e Haliclona melana (fundo), modelos já utilizados em nosso laboratório em diversos experimentos. Os animais serão coletados em seus ambientes, levados ao laboratório em caixas refrigeradas, limpos de detritos e aclimatados por três dias em água do mar com salinidade ajustada de acordo com a do local de coleta (solução isosmótica). Os testes consistirão na dissociação mecânica das células do animal em solução isosmótica, que serão transferidas para placas de Petri, levadas ao microscópio óptico e fotografadas. Em seguida serão adicionadas no meio, soluções hipo ou hiperosmóticas na faixa entre 25 a 45‰ (normal: ~33‰), sendo acompanhada a variação do volume celular no tempo e na amplitude por meio da medição das células isoladas em intervalos predefinidos. Para medir os efeitos, imagens digitalizadas das células em suspensão serão analisadas com o auxilio do programa ImageJ. As alterações no volume celular serão quantificadas a partir das medidas da área celular (bidimensional) convertidas para o sólido adequado (semi-esférico ou cilíndrico, dependendo do tipo celular). Para avaliação do papel das AQPs no processo, os mesmo ensaios serão realizados com uma solução do inibidor sulfato de manganês com metade da concentração inibitória máxima (IC50) para cada espécie, determinada em experimentos prévios. Usando esta abordagem, análises adicionais serão realizadas com a espécie intertidal em intervalos ao longo do ciclo de maré, buscando verificar se a presença de AQPs acompanha, antecipa ou responde à variação do nível da água (Maré).
Devido à necessidade de condições ambientais específicas para a coleta de animais, as etapas experimentais ocorrerão de forma cíclica, ao longo do ano, a depender desses fatores.

Solicitações

Sala de balança, sala dos aquários e sala de amostras.
Balança, Microscópio de luz, lupa e câmara climática
Esponjas: Hymeniacidon heliophila e Haliclona melana.
Canal de São Sebastião.
Sim, marés baixas.
Não
  • Setembro
  • Novembro
7
2