Parecer da Comissão Científica

Aprovado
Projeto do CEBIMar

Dados do solicitante

Anaclara de Almeida Rosa

Natureza do projeto

Projeto de formação discente
Mestrado
Renato Massaaki Honji
Por favor, selecione

Pesquisadores ou docentes associados

Recursos

não tem
Capes

Descrição do projeto

Caracterização do eixo cérebro-hipófise-gônodas de fêmeas de garoupa verdadeira Epinephelus marginatus (Perciformes: serranidae) em ambiente natural e cativeiro
19-10-2021
30-06-2023
Fatores ambientais como temperatura, pluviosidade, fotoperíodo e também as estruturas sociais modulam os
processos reprodutivos da maioria dos peixes teleósteos. Esses fatores exógenos exercem influência sobre o sistema
neuroendócrino, que coordena endogenamente os mecanismos fisiológicos da reprodução. O eixo cérebro-hipófise-
gônadas (C-H-G) sintetiza e libera neuro-hormônios, neurotransmissores, gonadotropinas, esteroides gonadais dentre
outras substâncias, que atuam em sinergia permitindo que a reprodução ocorra com sucesso. A garoupa verdadeira,
Epinephelus marginatus, é um peixe teleósteo hermafrodita protogínico de grande importância ecológica no Brasil,
porém atualmente se encontra ameaçada de extinção. A complexidade da sua fisiologia reprodutiva limita a produção
da espécie, principalmente pela dificuldade das fêmeas em alcançar a maturação gonadal, quando as gônadas sofrem
alterações morfofisiológicas para produção e liberação de gametas funcionais. Considerando esses fatores, a presente
proposta tem como objetivo geral estudar a fisiologia reprodutiva do eixo C-H-G, comparando animais capturados em
ambiente natural e animais nascidos e criados em cativeiro. Os mecanismos envolvidos nas disfunções reprodutivas
em teleósteos criados em cativeiro ainda são pouco compreendidos e espera-se que os resultados desse estudo
possam contribuir no entendimento das bases fisiológicas destas disfunções assim como gerar aplicações para a
melhoria do cultivo de E. marginatus, contribuindo para a conservação dessa espécie emblemática, ameaçada de
extinção.
reprodução; expressão gênica; espécie ameaçada; hermafroditismo protogínico; conservação
Serão utilizados adultos de E. marginatus coletados em ambiente natural (G1) por pescadores artesanais no município de São Sebastião-SP. Para o grupo de cativeiro (G2), os animais adultos nascidos e criados em cativerio serão adquiridos da piscicultura comercial Redemar alevinos (Ilhabela/ SP). Considerando o status de ameaça da espécie, serão utilizados o mínimo possível de animais (cerca de 10 indivíduos por grupo experimental). Para o G1, os animais coletados em ambiente natural serão transferidos ao CEBIMar, anestesiados e eutanasiados (de acordo com as normas do Comitê de Ética do IB/USP) e serão coletados amostras de encéfalos, hipófises e gônadas e logo em seguida, congelados em nitrogênio líquido para posterior análises moleculares. Para o G2, os animais adquiridos na empresa Redemar, também serão transferidos ao CEBIMar e os mesmos tecidos serão coletados e congelados. Para a confirmação do estágio reprodutivo, amostras das gônadas serão avaliadas por técnicas rotineiras de histologia. Essas amostras serão usadas para análise molecular da expressão dos genes associados ao eixo H-H-G, através da técnica RT-PCR. Para o hipotálamo serão analisadas as expressões gênicas de gnrh e aromatase cerebral e, assim como para as gônadas, os marcadores moleculares dos genes alvo da via esteroidogênica e da diferenciação sexual (sox9, dmrt1, amh, foxl2 ,20-hsd e aromatase gonadal) serão analisadas de acordo com os primers já descritos para o gênero Epinephelus (Chai et al. 2013; Sun et al. 2016; Palma et al. 2018). Para a hipófise, a expressão gênica das gonadotropinas (FSH e LH) serão utilizadas primers já descritas pelo nosso grupo de pesquisa para E. marginatus (Garcia et al. 2013). É importânte salientar que todos estes primers já foram testados e padronizados para E. marginatus. Serão obtidos também dados do perfil plasmático dos esteroides sexuais (T, E2 e 11-KT) pelo método de ELISA (Elisaimunoensaio) com uso de kits comerciais.
Atividades 2021 jan fev mar abr mai jun jul ago set out nov dez

Captura dos animais (ambiente natural) x x
Adaptação das estruturas físicas x x x
Recebimento dos animais (cativeiro) x x x
Coleta do material biológico x x x
Análises histológicas x x x
Análises moleculares x x x
Análises de resultados x x x
2022

Captura dos animais (ambiente natural) x x x x x
Coleta do material biológico x x x x x
Análises histológicas x x x x x x
Análises moleculares x x x x x x
Análises de resultados x x x x x x
2023
Análises hormonais x x x x x

Solicitações

Containers (branco e verde), as estufas e a base atrás do Prédio Erasmo. Eventualmente será utilizada a sala de microscopia, sala de preparações e das balanças e a sala 7 (onde se encontra o equipamento de micrótomo).
Sala de microscopia e sala 7 (microscópio, estereomicroscópio e micrótomo adquiridos do Jovem Pesquisador)
nada a declarar
nada a declarar
não
Não
  • Janeiro
  • Fevereiro
  • Março
  • Abril
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