Projeto de pesquisa

Para o planejamento de 1 ano, 10 espécies de corais escleractíneos zooxantelados, comuns nos recifes brasileiros, serão coligidas de três ambientes recifais com diferentes níveis de turbidez e sedimentação: Fernando de Noronha (oligotrófico), Maragogi/AL (mesotrófico) e Porto Seguro/BA (eutrófico). As espécies serão, a saber: Agaricia fragilis, Favia gravida, Madracis decactis, Montastraea cavernosa, Mussismilia harttii e/ou M. hispida, Porites astreoides e/ou P. branneri, Scolymia wellsii e/ou Siderastrea stellata. Em cada localidade, diferentes variáveis físico-químicos serão aferidas: temperatura, oxigênio dissolvido, salinidade, pH, luminosidade, turbidez, matéria orgânica particulada/dissolvida, nitrato e fosfato por meio de um medidor multiparâmetro portátil. Para cada população de cada espécie, indivíduos/fragmentos (N=12) serão coletados, imediatamente armazenados em nitrogênio líquido, e assim enviados ao CEBIMar-USP de onde serão analisados os marcadores fisiológicos e bioquímicos. As demais amostras serão direcionadas para os grupos de pesquisa colaboradores para a avaliação das outras métricas (ecologia trófica e biologia molecular). A água do mar local será filtrada (filtro de fibra de vidro Whatman 47 mm) para análise da matéria orgânica em suspensão (material particulado), a qual será expressa como massa percentual de C, H, N e S (Analisador Elementar CHNS/O 2400, Perkin Elmer).
Biomarcadores - Heterotrofia:
Quantificaremos a presença de três ácidos graxos como marcadores em seus tecidos: ácido estearidônico (SDA, 18:43), ácido docosapentaenóico (DPA, 22:53) e ácido cis-gondóico (CGA, 20:19). Os ácidos graxos serão extraídos de acordo com Bligh e Dyer (1959), com as modificações realizadas em Pupier et al. (2021). Adicionaremos à amostra 1,0 mL de uma solução metanol:diclorometano (1:1), e 125 μL do padrão interno (C13:0, em concentração de 5 mg mL-1 em solução de hexano). Posteriormente os tubos serão agitados por 1 min e centrifugados em 10.000 x g a -4 ºC. O solvente será secado em N2 puro, e as amostras metiladas ao serem dissolvidas em 500 μL de HCl (5% em solução de metanol) e mantidas em 100ºC por 2 h. A extração será então realizada com hexano. Os procedimentos de análise cromatográfica serão realizados de acordo com Martins et al. (2018). - Densidades de endossimbiontes e clorofila a: Cada fragmento congelado terá os tecidos retirados com o auxílio de um Waterpik portátil (WP-360) com água do mar filtrada, sendo a densidade de endossimbiontes quantificada por meio de um hemocitômetro (Krueger et al. 2015). A clorofila a será extraída no escuro em N, N-dimetilformamida, a 4°C por 48 h que, após centrifugação em 3900 g a 4 °C por 5 min, terá o sobrenadante lido em 646 nm, 663 nm e 750 nm, e a concentração determinada utilizando-se as equações de Porra et al. (1989). Os dados serão normalizados pela área de tecido do coral, e expressos em número de células cm-2 e μg de clorofila a cm-2, respectivamente. - Capacidade antioxidante e lipoperoxidação: Aproximadamente 0,5 cm2 de cada população serão homogeneizados em tampão específico para cada análise, utilizando-se um sonicador (70 kHz, Sonaer/EUA). A fase intermediaria do homogeneizado, contendo o tecido do hospedeiro e dos endossimbiontes, será separada (Krueger et al. 2015) e utilizada para as análises nas diferentes partes do holobionte. A capacidade antioxidante total será medida utilizando-se o kit comercial colorimétrico “OxiSelect™ Total Antioxidant Capacity (TAC) Assay Kit” (Cell Biolabs Inc.,San Diego, CA, USA). A peroxidação lipídica será determinada utilizando-se o método fluorimétrico descrito por Oakes e Van Der Kraak (2003), o qual baseia-se na medida das substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS).
Estatística - métodos comparativos filogenéticos: Utilizar-se-á um conjunto métodos analíticos e pacotes estatísticos na plataforma R (R Development Core Team 2015) dentre eles, destacam-se: Padrão filogenético (Autocorrelação pelo I de Moran); Evolução correlacionada (Phylogenetic generalized least squares, pGLS); Reconstrução ancestral (Máxima verossimilhança); Convergência adaptativa.