Projeto de pesquisa

Para avaliação dos efeitos relacionados às alterações de temperatura e pH, serão coletadas no litoral Norte do Estado de São Paulo (São Sebastião, Caraguatatuba e Ilhabela) colônias de duas espécies pertencentes a 9 famílias de briozoários Cheilostomatidas, totalizando 18 espécies a serem avaliadas. Tais coletas serão realizadas através de mergulho livre e scuba, em profundidades até 20 metros. As colônias serão transportadas in vivo em água do mar até o Centro de Biologia Marinha da Universidade de São Paulo (CEBIMar-USP). Para cada colônia coletada, serão obtidos ao menos três fragmentos: um será acondicionado em álcool 70% para a avaliação morfológica, e dois serão mantidos secos para a análise da composição biomineral e bioquímica. Essas etapas serão conduzidas antes do experimento laboratorial, permitindo a comparação com os dados finais. Os fragmentos destinados à identificação serão limpos, secos e examinados em microscópio estereoscópico. Em seguida, esses espécimes serão preparados e montados em suportes metálicos para observação em um microscópio eletrônico de varredura no Laboratório Avançado de Microscopia e Imagem da Universidade Federal de Pernambuco (LAMI-UFPE).
O protocolo de cultivo e clonagem das colônias in vivo será desenvolvido seguindo diretrizes previamente estabelecidas. Cada colônia será cultivada em substratos adequados e divididas em tamanhos padronizados. Antes do início do experimento, as colônias serão aclimatadas em aquários do CEBIMar e alimentadas duas vezes ao dia com uma mistura de microalgas. Ao final da aclimatação, cada aquário incluirá uma colônia de cada espécie. Serão avaliados experimentalmente as tolerâncias térmicas e resistência à acidificação dos briozoários por um período mínimo de 14 dias, sendo avaliadas as diferentes respostas morfológicas, taxa de crescimento, taxa metabólica e mineralização das colônias. Os tratamentos serão submetidos às condições de temperatura e pH, simulando cenários de mudanças climáticas. Serão criadas duas condições experimentais, controle e tratamento simulado, combinando temperatura com pH, que serão medidos diariamente. Na condição controle, será utilizada a temperatura e o pH do local de amostragem das colônias. No tratamento simulado, será utilizado o aumento de temperatura (+3,5º C) e redução de pH (-0,3 pH) seguindo os dados do IPCC.
Ao final da fase experimental, fragmentos das colônias serão separados para análise morfológica, bioquímica e mineralógica. A análise morfológica será feita por registros fotográficos e microscopia eletrônica de varredura (MEV) para avaliar, respectivamente, o crescimento colonial e a morfologia, com o auxílio do software ImageJ. O crescimento colonial será determinado pela quantificação dos estágios astogenéticos das colônias de diferentes espécies no início e no final do período de exposição aos tratamentos experimentais. Para a análise bioquímica, os fragmentos das colônias serão armazenados em tubos e congelados em ultrafreezer, utilizando nitrogênio líquido, para obtenção de dados sobre enzimas e marcadores de calcificação, metabolismo energético e oxidativo.
A análise da composição mineral do esqueleto das espécies será realizada em parceria com o Laboratório de Terras Raras (BSTR) e o Laboratório de Tecnologia dos Aglomerantes (LabTag) da Universidade Federal de Pernambuco, utilizando Difração de Raios-X (DRX. A fim de preservar a integridade da mineralogia esquelética, os espécimes não passaram por limpeza ou tratamento químico, evitando vieses analíticos. Por fim, as respostas biológicas serão analisadas por meio de planilhas que consolidarão todos os dados obtidos. Os resultados dos experimentos laboratoriais serão analisados utilizando um Teste t pareado filogenético comparando os dados antes e depois, além de uma MANOVA para avaliar o efeito da temperatura e pH nas métricas. A presença de sinal filogenético será investigada utilizando métodos comparativos, com base em topologias recentes.