Projeto de pesquisa
Parecer da Comissão Científica
Aprovado
Projeto do NP-BioMar
Dados do solicitante
Letícia Palmeira Pinto
Natureza do projeto
Projeto de formação discente
Mestrado
José Roberto Machado Cunha da Silva
Por favor, selecione
Pesquisadores ou docentes associados
Andrews Krupinski Emerenciano
Willian Reina Joviano
Luis Fernando Marques dos Santos
João Carlos Shimada Borges
Amanda Ribeiro Rosa
Recursos
2017/25568-0
Fapesp
Descrição do projeto
Avaliação de alterações morfológicas e moleculares induzidas por nanopartículas de dióxido de titânio (nano-TiO2) em embriões do ouriço-do-mar tropical Lytechinus variegatus (Lamarck, 1816)
02-05-2018
30-04-2021
Nanopartículas (NPs) constituem uma fonte de poluição ambiental difusa e de difícil remediação, tornando-se assim, um grande e crescente problema ambiental. Dentre os diferentes tipos de NPs, as de dióxido de titânio (nano-TiO2) estão presentes em inúmeros produtos de consumo humano. Por decorrência dessa ampla utilização, as nano-TiO2 podem ser inseridas facilmente de maneira passiva em ecossistemas marinhos. Os ouriços-do-mar são considerados excelentes bioindicadores para avaliar a toxicidade de muitos compostos químicos que são considerados estressores ambientais, especialmente durante seus estágios embrionários. A exposição à NPs em estágios inicias pode, principalmente, implicar no desenvolvimento e estabelecimento dessas espécies, especialmente em águas costeiras onde as NPs estão menos difusas e em concentrações maiores. Considerando os efeitos nocivos em ambiente marinho, o presente trabalho tem por objetivo avaliar os efeitos da exposição a nano-TiO2 (1 e 5 g/mL) em embriões do ouriço-do-mar tropical Lytechinus variegatus (12 e 24 h pós-fertilização).Para tanto, serão avaliados os seguintes parâmetros: morfológicos, levando em consideração malformações; perfil transcricional de genes e componentes de vias de sinalização induzidos frente ao estresse ambiental (HSPs e MPKs); e o possível acúmulo de nano-TiO2 por microscopia eletrônica de transmissão. Desta forma, os resultados trarão uma nova perspectiva para o potencial impacto da nano-TiO2 durante o desenvolvimento do ouriço-do-mar tropical, podendo contribuir com novas ferramentas para o biomonitoramento em ambiente marinho
Nanopartícula; Dióxido de TiO2; embrião de ouriço.
- Delineamento experimental
Os embriões serão cultivados em placas de 24 poços e divididos em dois grupos pós-fertilização (hpf): 12hpf e 24hpf e expostos a duas concentrações diferentes de nanoTiO2 (1 e 5 g/mL). Os experimentos serão realizados em triplicata em três períodos distintos com os respectivos controles negativos e controles positivos (expostos a sulfato de cobre).
- Fertilização para o teste de toxicidade
Os gametas de indivíduos 3 machos e 3 fêmeas serão coletados das gônadas após indução com injeção de KCl-1M (40 L por g de peso corporal). Os ovos serão coletados em FSW (filtred sea water) a 0,22 microm, os espermas serão recolhidos com pipeta pasteur, colocados em Eppendorfs estéreis no gelo até a fertilização. Após as coletas dos ovos será adicionado uma solução de 5mL de esperma (1:1000 em FSW) suspendendo os ovos para a fertilização acontecer. Aproximadamente 30 min após a fertilização os embriões serão expostos à nano-TiO2 suspensas em FSW (previamente sonicada) e incubados a 24.C no escuro. Após 12hpf e 24hpf os embriões serão fixados em Formol 4% e monitorados no microscópio de luz.
-Caracterização da nano-TiO2
-Teste de Toxicidade em gametas
-Morfologia e Microscopia de luz
-Análise ultraestrutural embrionária
-Extração de RNA
-Avaliação da expressão gênica por qPCR em tempo real
Os embriões serão cultivados em placas de 24 poços e divididos em dois grupos pós-fertilização (hpf): 12hpf e 24hpf e expostos a duas concentrações diferentes de nanoTiO2 (1 e 5 g/mL). Os experimentos serão realizados em triplicata em três períodos distintos com os respectivos controles negativos e controles positivos (expostos a sulfato de cobre).
- Fertilização para o teste de toxicidade
Os gametas de indivíduos 3 machos e 3 fêmeas serão coletados das gônadas após indução com injeção de KCl-1M (40 L por g de peso corporal). Os ovos serão coletados em FSW (filtred sea water) a 0,22 microm, os espermas serão recolhidos com pipeta pasteur, colocados em Eppendorfs estéreis no gelo até a fertilização. Após as coletas dos ovos será adicionado uma solução de 5mL de esperma (1:1000 em FSW) suspendendo os ovos para a fertilização acontecer. Aproximadamente 30 min após a fertilização os embriões serão expostos à nano-TiO2 suspensas em FSW (previamente sonicada) e incubados a 24.C no escuro. Após 12hpf e 24hpf os embriões serão fixados em Formol 4% e monitorados no microscópio de luz.
-Caracterização da nano-TiO2
-Teste de Toxicidade em gametas
-Morfologia e Microscopia de luz
-Análise ultraestrutural embrionária
-Extração de RNA
-Avaliação da expressão gênica por qPCR em tempo real
Coleta e Cultivo do embrião: Maio 2018 / Maio 2019 / Maio 2020
Exposição ao TiO2; : Maio 2018 / Maio 2019 / Maio 2020
Morfologia e Microscopia de luz: Maio 2018 / Maio 2019 / Maio 2020
Caracterização da nanopartícula : Jun 2018
Análise ultraestrutural embrionária: Jul e Ago 2018 - Jul e Ago 2019
Avaliação de genes de estresse: Jun 2018 - Dez 2019
Disciplinas Jan 2018 - Set 2019
Qualificação Fev 2019
Analise estatística Dez 2018 - Maio 2020
Exposição ao TiO2; : Maio 2018 / Maio 2019 / Maio 2020
Morfologia e Microscopia de luz: Maio 2018 / Maio 2019 / Maio 2020
Caracterização da nanopartícula : Jun 2018
Análise ultraestrutural embrionária: Jul e Ago 2018 - Jul e Ago 2019
Avaliação de genes de estresse: Jun 2018 - Dez 2019
Disciplinas Jan 2018 - Set 2019
Qualificação Fev 2019
Analise estatística Dez 2018 - Maio 2020
Solicitações
Bancada e aquário.
Microscópio
Centrifuga
Centrifuga
Ouriço-do-mar verde (Lytechinus variegatus).
Ao redor do costão rochoso da praia do Cabelo Gordo.
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- NEC_STRUCT
- NEC_TECH_SUPP_COLLEC
- NEC_COLLEC
- NEC_VESSEL
- Fevereiro
- Março
- Abril
5
4